Molekulare biologescher Fuerschung Methoden an hire Gebrauch

Molekulare biologescher Fuerschung Methoden spillen eng wichteg Roll an modern Medezin, PDSA Wëssenschaft a Biologie. Dank Fortschrëtter vun der Etude vun DNA an RNS, ass der Persoun konnt den Daniel Nepgen vun der iwerfriess bestëmmen der causative Agent ze entdecken, déi gewënscht Nukleinsaier an enger Mëschung aus Saieren ze erkenne, etc.

Molekulare-biologescher Methoden. Wat ass et?

Back am 70-80s vun de Wëssenschaftler war déi éischt zu zerwéiert der mënschlecher Nepgen. Dëst Evenement huet Elan zu der Entwécklung vun genetesch Wëssenschaft a molekulare Biologie. Etude vun Eegeschafte vun DNA an RNS huet gemengt, dass et elo méiglech ass dës definitiv Saieren fir den Zweck vun Krankheet Diagnos, studéieren Gene konzentréiert.

Virbereedung vun DNA an RNS

Molekulare biologescher Diagnostice Methoden verlaangen ab Material: oft dës Nukleinsaier. Et gi verschidde Manéieren dës Stoffer aus der Zellen Liewensstandard Organismen ze wielen. All huet seng Virdeeler an Nodeeler, an et soll een gin, wann eng Method vun Isoléierschaum definitiv Saieren zu reng Form ausgesicht.

1. Virbereedunge vun DNA vun Marmur. D'Method besteet am Mëschung aus Alkohol Substanzen bestéet, precipitates doraus reng DNA. D'Nodeeler vun dëser Method ass de Gebrauch vun gëfteg Substanzen, phenol an chloroform.

2. Isolatioun vun DNA op der Opschwong. D'Haaptrei Substanz déi hei gebraucht gëtt - ass guanidine thiocyanate (GuSCN). Si ënnerstëtzt d'Oflagerung vun deoxyribonucleic sauerem op spezialiséiert dat heescht de Législateur, vun deem kann et dono mat Hëllef vun engem speziell Prellbock gesammelt ginn. GuSCN awer - ass eng inhibitor vum TCP, an esouguer e klenge Deel vun deem an DNA verschéckt kritt am Laf vun der polymerase Kette Reaktioun Afloss kann, wat wichteg ass, wann mat definitiv Saieren schaffen.

3. Nidderschlag vun Gëftstoffer. D'Method Ënnerscheed virdrun déi an datt d'Molekülle selwer net dehoksiribonukleinovoy Seier an Gëftstoffer verschéckt ginn. Maachen dëst, benotzen den Ion exchangers. De Nodeel ass, datt net all Substanzen Zelt kann.

4. Mass Kontroll. Dës Method ass am Fäll benotzt wann Dir nët korrekt Informatiounen iwwert d'Struktur vun der DNA Protein hunn musst, an de Besoin fir e puer Statistiken kréien. De Grond ass, dass de Nukleinsaier Struktur kann beschiedegt ginn wann Spullmëttel Ëmgank, besonnesch alkalies.

Klassifikatioun vun Fuerschung Methoden

All molekulare-biologescher Methode vun Fuerschung sinn an dräi grouss Gruppen ënnerdeelt:

1. Amplification (e Majorzsystem vun Enzymen of benotzt). Dëst beinhalt Hinnen alleguer - polymerase Kette Reaktioun, déi zu villen vun der Diagnostice Methode eng wichteg Roll spillt.

2. Neamplifikatsionnye. Dës Grupp vu Methode ass verbonne direkt mat der Aarbecht vun Nukleinsaier Dampgemësch. Beispiller sinn 3 Arte blots, an situ hybridization, etc.

3. Method baséiert op d'Unerkennong vun der Signal aus der SUGGERÉIEREN Protein, wat zu engem bestëmmten DNA oder RNS SUGGERÉIEREN bent. Beispill - hybridization System Hybride ech kréien System Léisung (hc2).

Enzymen of, dass am molekulare biologescher Fuerschung Methode kann benotzt ginn

Vill molekulare Diagnostice Techniken bezitt de Gebrauch vun breeder Palett vun Enzymen of. Drënner sinn stäerkste oft benotzt:

1. Restriktioun Aktivitéit - "Zentral" vum DNA Protein fir déi néideg Deeler.

2. DNA polymerase - synthesizes eng duebel-gekëmmert deoxyribonucleic sauerem Protein.

3. Réckproduktioun transcriptase (ëmgedréint transcriptase) - benotzt DNA aus engem RNS Skelett zu synthesize.

4. DNA ligase - ass fir d'Équipe vun phosphodiester Obligatiounen tëscht nucleotides responsabel.

5. exonuclease - verschwënnt nucleotides aus Enn Portiounen vun der deoxyribonucleic sauerem Protein.

Hinnen alleguer - déi elementar Method vun DNA amplification

Polymerase Kette Reaktioun (Hinnen alleguer) ass an modern molekulare Biologie oft benotzt. Dës Method, an deem engem eenzege DNA Protein kann eng grouss Zuel vun Exemplairen (hire Protein) kritt ginn.

D'Haaptrei Funktiounen vun Hinnen alleguer:

- Diagnos vun Krankheeten;

- Klone DNA Segmenter, Gene.

Ze droen aus der polymerase Kette Reaktioun déi folgend Elementer verlaangt: initial DNA Protein, engem thermostable DNA polymerase (Taq oder Pfu), deoxyribonucleotide phosphates (Quelle vun Stéckstoff Base), der primers (2 primer 1 DNA Protein) a selwer e Prellbock System deen Exercice kann all Reaktioune.

Hinnen alleguer besteet aus dräi Schrëtt: denaturation, primer annealing an elongation.

1. denaturation. Op enger Temperatur vun 94-95 Grad Celsius proshodit Paus de Waasserstoff Obligatiounen tëscht déi zwee Ketten vun DNA, an als Resultat kréien mir zwee Single-gekëmmert Molekülle.

2. annealed primers. Op enger Temperatur vun 50-60 Grad centigrade existeiert Bäitrëtt primers um Enn vun Single-gekëmmert Nukleinsaier Molekülle no der Zort vun complementarity.

3. Elongation. Bei enger Temperatur vun 72 ° ass Wierderbuch Duechter duebel deoxyribonucleic sauerem Molekülle gekëmmert.

DNA sequencing

Molekulare biologescher Fuerschung Methoden verlaangen oft Wëssen vun der Haaptrei vun nucleotides an engem Protein vun deoxyribonucleic sauerem. Ze bestëmmen d' genetesch Code Nepgen. Molekulare Diagnos vun der Zukunft wäerten op d'Wëssen an d'Determinatioun vun de Mënscherechter Haaptrei verdengten ginn baséiert.

Dësen Zorte vun sequencing:

• sequencing vun der Maxam-Gilbert;
• Sanger sequencing;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe sequencing.